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臺式高速離心機密度梯度離心法介紹

更新時間:2017-06-28      點擊次數:6103

  在實際使用中,根據樣品(pin)的(de)不(bu)同(tong)需要使用臺式(shi)高速離心機采用(yong)不同的分(fen)(fen)離(li)方法進行分(fen)(fen)離(li)。分(fen)(fen)離(li)方法一般有三種,今天介紹密度梯(ti)度離(li)心法。

  密(mi)度(du)(du)(du)(du)梯(ti)度(du)(du)(du)(du)離心(xin)(xin)也稱(cheng)為平(ping)衡密(mi)度(du)(du)(du)(du)梯(ti)度(du)(du)(du)(du)離心(xin)(xin)。密(mi)度(du)(du)(du)(du)梯(ti)度(du)(du)(du)(du)離心(xin)(xin)是(shi)根據樣品中(zhong)各(ge)組分(fen)的(de)浮(fu)力密(mi)度(du)(du)(du)(du)差不同(tong)進行分(fen)離。在離心(xin)(xin)場(chang)中(zhong),溶液(ye)(ye)中(zhong)顆(ke)粒浮(fu)力密(mi)度(du)(du)(du)(du)小(xiao)則上浮(fu),浮(fu)力密(mi)度(du)(du)(du)(du) 大則下(xia)(xia)沉,上浮(fu)和下(xia)(xia)沉的(de)顆(ke)粒會一直(zhi)延梯(ti)度(du)(du)(du)(du)液(ye)(ye)移動(dong)到(dao)與(yu)其(qi)浮(fu)力密(mi)度(du)(du)(du)(du)恰好相等的(de)位置上,該位置也稱(cheng)顆(ke)粒的(de)等密(mi)度(du)(du)(du)(du)點,離心(xin)(xin)時樣品各(ge)組分(fen)顆(ke)粒將按其(qi)密(mi)度(du)(du)(du)(du)大小(xiao)分(fen)別移等密(mi)度(du)(du)(du)(du)點形成區(qu)帶,形成的(de)區(qu)帶不會因(yin)離心(xin)(xin)時間長而發(fa)生(sheng)變化。離心(xin)(xin)后收(shou)集(ji)所(suo)需(xu)區(qu)帶顆(ke)粒即為純化組分(fen)。離心(xin)(xin)前(qian)后樣品的(de)狀態如下(xia)(xia)圖所(suo)示。

 

  因此,在離心前,樣品可置于梯度液的任意位置,一般是均勻分布在梯度液中。等密度區帶離心法的離心效果取決于樣品顆粒的浮力
密度差,密度差越大,分離效果越顯著,與樣品顆粒的大小與現狀無關。
等密度(du)梯度(du)離心經常使用(yong)的梯度(du)液包括(kuo)氯化(hua)(hua)銫(CsCI)、溴(xiu)化(hua)(hua)鈉等,典型的應用(yong)包括(kuo)質粒DNA(或者其他DNA、RNA片(pian)段)的大(da)規模高純(chun)度(du)純(chun)化(hua)(hua),脂(zhi)蛋白(bai)的分離純(chun)化(hua)(hua)等。
質粒DNA的氯化(hua)銫等(deng)密度梯度離(li)心分離(li)純化(hua)流程如下: 
 

  

脂蛋(dan)白溴化鈉等密度梯度離(li)心分離(li)純化流程如(ru)下:

1)人(ren)全血(xue)1000 g離(li)心10分鐘去(qu)除各種血(xue)細(xi)胞,上清(qing)為血(xue)清(qing)。

2)血(xue)清加入NaBr密度(du)梯(ti)度(du)液(不(bu)連續梯(ti)度(du))的底(di)部,往上依次鋪濃度(du)變小的梯(ti)度(du)液。

3)然后在(zai)水平轉頭中(zhong),260,000 g離心(xin)力(li)14℃下(xia)離心(xin)24小時,各(ge)種(zhong)密度(du)的脂(zhi)蛋白(bai)從管底浮向它們自己的等密度(du)區形成了純的各(ge)種(zhong)密度(du)脂(zhi)蛋白(bai)區。而(er)離心(xin)管底部保留著各(ge)種(zhong)血清蛋白(bai)。
4)用(yong)上(shang)排法從離心管(guan)中(zhong)抽(chou)出格(ge)層(ceng)液體(ti),經DU蛋白分析儀測定(ding),定(ding)位各(ge)種不同(tong)密度血清脂蛋白。 

  以(yi)上(shang)是蜀科(ke)臺式(shi)高速離(li)心機(ji)密(mi)度梯度離心法的(de)介(jie)紹,需要相關離心機的(de)朋友更多詳情可以咨(zi)詢蜀科(ke)儀器。

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